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动物(Plant)烟曲霉毒素 (Fumonisin) ELISA 检测试剂盒

时间:2019-01-11    点击: 次    来源:网络    作者:佚名 - 小 + 大

  Fumonisin试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附尝试(ELISA).已知Fumonisin浓度的尺度品、未知浓度的样品插手微孔酶标板内进行检测。先将Fumonisin和生物素标识表记标帜的抗体同时温育。洗涤后,插手亲和素标识表记标帜过的HRP。再颠末温育和洗涤,去除未连系的酶连系物,然后插手底物A、B,和酶连系物同时感化。发生颜色。颜色的深浅和样品中Fumonisin的浓度呈比例关系。

  试剂应按标签仿单贮存,利用前规复到室温。稀稀事后的尺度品应抛弃,不成保留。

  利用一次性的吸头免得交叉污染,吸收终止液和底物A、B液时,避免利用带金属部门的加样器。

  底物A应挥发,避免永劫间翻开盖子。底物B对光敏感,避免永劫间表露于光下。避免用手接触,有毒。尝试完成后应当即读取OD值。

  血清-----操作历程中避免任何细胞刺激。利用不含热原和内毒素的试管。网络血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞敏捷小心地分手。

  血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

  组织匀浆-----将组织插手适量心理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

  保留------若是样品不妥即利用,应将其分成小部门-70 ℃保留,避免频频冷冻。尽可能的不要利用溶血或高血脂血。若是血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品平均地充实化冻。

  尺度品:尺度品的系列稀释应在尝试时预备,不克不及贮存。稀释前将尺度品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

  800 ng/ml(5号尺度品)100ul的原倍尺度品插手100ul的尺度品稀释液

  利用前,将所有试剂充实混匀。不要使液体发生大量的泡沫,免得加样时插手大量的气泡,发生加样上的偏差。

  按照待测样品数量加上尺度品的数量决定所需的板条数。每个尺度品和空缺孔提议做复孔。每个样品按照本人的数量来定,能利用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后插手50ul于反映孔内。

  插手稀释好后的尺度品50ul于反映孔、插手待测样品50ul于反映孔内。当即插手50ul的生物素标识表记标帜的抗体。盖上膜板,悄悄振荡混匀,37℃温育1小时。

  甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。反复此操作3次。若是用洗板机洗涤,洗涤次数添加一次。

  每孔插手60ul的亲和链酶素-HRP,悄悄振荡混匀,37℃温育30分钟。

  甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。反复此操作3次。若是用洗板机洗涤,洗涤次数添加一次。

  每孔插手底物A、B各50ul,悄悄振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

  1. 活络度:最小的检测浓度小于1号尺度品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度有关系数R值为0.990。

  2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),响应的Fumonisin尺度品浓度为横坐标(X),做得响应的曲线,样品的Fumonisin含量可按照其OD值由尺度曲线换算出响应的浓度。

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